摘要：采用液相色譜法對(duì)蔬菜中甲基對(duì)硫磷、乙基對(duì)硫磷、甲拌磷進(jìn)行同時(shí)分離和檢測(cè)，對(duì)樣品的提取、凈化以及檢測(cè)的色譜條件進(jìn)行篩選和優(yōu)化。以shim-pack VP-ODS為分離柱；流動(dòng)相為V甲醇：V水=85：15，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm。該方法所測(cè)得的3種有機(jī)磷在0.02—2.0μL內(nèi)具有良好的線(xiàn)性，檢出限達(dá)1.0—5.0μL，加標(biāo)回收率在97.44％一101.22％。該方法適合各種蔬菜農(nóng)藥殘留量的分析。
關(guān)鍵詞：農(nóng)藥殘留；液相色譜法；蔬菜；有機(jī)磷
有機(jī)磷農(nóng)藥是目前我國(guó)使用量較大的殺蟲(chóng)劑之一，主要應(yīng)用于糧食、蔬菜和水果上。雖然有機(jī)磷農(nóng)藥屬非持久性農(nóng)藥，但其大量使用必然會(huì)對(duì)環(huán)境產(chǎn)生負(fù)面影響，對(duì)人、蓄構(gòu)成嚴(yán)重威脅．長(zhǎng)期食用受污染的糧食、蔬菜，是導(dǎo)致癌癥、動(dòng)脈硬化、心血管病、胎兒畸形、死胎、早天、早衰等疾病的重要原因；絕大多數(shù)人食用有害蔬菜后并不馬上表現(xiàn)出癥狀，但毒物在人體中富集，時(shí)間長(zhǎng)了便會(huì)釀成嚴(yán)重后果。我國(guó)近年來(lái)發(fā)生的農(nóng)藥中毒事故大多數(shù)集中于高毒有機(jī)磷農(nóng)藥，以對(duì)硫磷zui多，部分地區(qū)占80％左右。因此，建立有效的檢測(cè)農(nóng)副產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的方法具有重要意義。有機(jī)磷農(nóng)藥的測(cè)定常采用氣相色譜法，可是，大部分有機(jī)磷農(nóng)藥具有很強(qiáng)的極性和熱不穩(wěn)定性，給氣相色譜分析帶來(lái)一定的難度。本研究采用液相色譜法同時(shí)測(cè)定蔬菜中甲基對(duì)硫磷、乙基對(duì)硫磷和甲拌磷。
1 實(shí)驗(yàn)部分
1．1 儀器與試劑
儀器．LC-1OAT液相色譜儀(日本島津公司)，包括：SPD-10AVP／10APVP紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器，LC-1OA高壓溶液輸送泵和N2000色譜工作站(浙江大學(xué)智能信息工程研究所)；BF2000氮?dú)獯蹈蓛x(北京八方世紀(jì)科技有限公司)；FS-1電動(dòng)勻漿機(jī)(金壇市富華儀器有限公司)．試劑．甲基對(duì)硫磷標(biāo)準(zhǔn)品(99.0％，國(guó)家農(nóng)藥質(zhì)檢中心(沈陽(yáng)))；乙基對(duì)硫磷標(biāo)準(zhǔn)品(99.0％，天津農(nóng)藥質(zhì)檢中心)；甲拌磷標(biāo)準(zhǔn)品(98.0％，天津農(nóng)藥質(zhì)檢中心)；甲醇(色譜純，北京化工廠)；乙腈(色譜純，天津市博迪化工有限公司)；實(shí)驗(yàn)用水為重蒸餾水。
1．2 色譜條件
色譜柱為Shim-Pack：VP-ODS(150L×4．6)；流動(dòng)相為V甲醇：V水=85：15；流速為1.0mL／min．進(jìn)樣量20μL，以基線(xiàn)構(gòu)成之面積稱(chēng)峰面積。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064 Wh/2h>峰面積外標(biāo)法定量。
1．3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
準(zhǔn)確稱(chēng)取一定量的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇制成一定濃度的儲(chǔ)備液，再逐級(jí)稀釋儲(chǔ)備液，得質(zhì)量濃度分別為0.10、0.50、1.0、1.5、2.0mg／L的標(biāo)準(zhǔn)混合液。
1．4 樣品處理方法
取1000g的白菜，取可食部分，用干凈的紗布擦去樣品表面的附著物，采用對(duì)角線(xiàn)分割法，取對(duì)角部分，將其切碎．準(zhǔn)確稱(chēng)取3份25g試樣，分別加入50.0mL的乙腈，在勻漿機(jī)中勻漿2min后用濾紙過(guò)濾，濾液收集到裝有5g氯化鈉的100mL的具塞量筒中，蓋上塞子，劇烈震蕩1min，靜至10min，使乙腈與水相分層．將含乙腈的有機(jī)層經(jīng)盛有3g的無(wú)水硫酸鈉的漏斗過(guò)濾于100mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，從中吸取10mL溶液，再用氮?dú)獯蹈蓛x吹至近干后用甲醇溶解定容至5mL，經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣。
2 結(jié)果與討論
2．1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇
分別將3種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液依次用UV一1100紫外／可見(jiàn)分光光度計(jì)進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，測(cè)得3種農(nóng)藥的zui大吸收波長(zhǎng)分別為甲基對(duì)硫磷265nm，乙基對(duì)硫磷259nm，甲拌磷為238nm．綜合考慮3種組分的zui大吸收值及靈敏度，zui終選擇紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm。
2．2 流動(dòng)相組成對(duì)分離度的影響
實(shí)驗(yàn)考察了甲醇-水的不同比例對(duì)甲基對(duì)硫磷、乙基對(duì)硫磷、甲拌磷分離的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著甲醇含量的增加，其分離度逐漸減小，當(dāng)甲醇：水=85：15時(shí)，各組分仍能夠得到很好的分離，且分析所用的時(shí)間較短。
2．3 工作曲線(xiàn)和檢出限
取“1．3”節(jié)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在優(yōu)化的色譜條件下進(jìn)行分析，得到標(biāo)準(zhǔn)色譜圖。同一樣品平行測(cè)定5次，取其平均值，繪制工作曲線(xiàn)，以峰面積A對(duì)濃度c(mg／L)回歸計(jì)算，結(jié)果表明線(xiàn)性關(guān)系良好，回歸方程、相關(guān)系數(shù)和檢測(cè)限。
2．4 精密度實(shí)驗(yàn)
取質(zhì)量濃度為1.5mg／L的混合標(biāo)準(zhǔn)品，在上述色譜條件下，連續(xù)進(jìn)行7次測(cè)定，經(jīng)計(jì)算得到測(cè)定甲基對(duì)硫磷、乙基對(duì)硫磷、甲拌磷的精密度RSD分別為4.6％、3.2％、2.9％。
2．5 回收率測(cè)定
在已知含量的白菜樣品中分別加入不同濃度的有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，按“1．4”節(jié)方法制備樣品液進(jìn)行測(cè)定，扣除樣品中原有的農(nóng)藥含量，求出加標(biāo)回收率，結(jié)果可知，甲基對(duì)硫磷回收率為95.44％～98.33％；乙基對(duì)硫磷回收率為93.33％～101.67％；甲拌磷回收率為94.00％～97.78％。
2．6 樣品分析
在白菜中加入上述3種農(nóng)藥作為模擬蔬菜樣品，按“1．4”節(jié)方法處理樣品后按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。得到樣品色譜圖如圖所示。甲基對(duì)硫磷、乙基對(duì)硫磷、甲拌磷的殘留量分別為1.75、2.13、1.83mg/kg。
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